GS固定染色套液與傳統固定染色套液在冷凍切片制備中的比較

GS固定染色套液與傳統固定染色套液

在冷凍切片制備中的比較

沈貴華  王知博  王冰凝  鄭波  謝阿歡

中國醫學科學院腫瘤醫院病理科

摘自：2012年第05期《診斷病理學雜志》

傳統固定染色套液雖然制片技術性質穩定，但是，所采用的試劑不夠環保。GS環保試劑套液彌補了此缺陷。冷凍報告的準確率取決于冷凍切片制備的成敗，而固定和染色是制備中的兩個***關鍵步驟。本文通過GS套液與傳統HE套液在冷凍切片制備過程中的效果比較，探討GS固定染色套液在冷凍切片制備過程中的應用。

1.材料與方法

 1.1 材料

標本隨機取自中國醫學科學腫瘤醫院手術標本，包括甲狀腺、淋巴結、肺、腎、腦、卵巢、消化管等128例。GS固定染色套液（哈爾濱格林標本技術開發有限公司研制并生產），傳統固定液（我院現用95%乙醇），HE染色套液，中性樹膠。

 1.2 方法

①取材與切片：取材后OCT包埋，行常規冷凍切片，厚度8 pm。②固定與染色：切片后室溫略干燥，分別放進兩種固定液中（GS無醛固定液和傳統95%乙醇），室溫固定1 min，分別行：

傳統HE套液染色:水洗—蘇木精1 min—水洗—1%鹽酸乙醇略分化—水洗—氨水返藍—水洗—伊紅10 s—稍水洗—梯度乙醇脫水—二甲苯透明—中性樹膠封固。

GS無汞套液染色:水洗—蘇木精1 min—水洗—分化液2 s—水洗—藍化液5 s—水洗—伊紅10 s—稍水洗—除浮染液2 s—95%乙醇—無水乙醇—透明液2 s—樹膠封固。

2.結果

 2.1 兩種固定液傳統染液染色結果

鏡下示，GS無醛固定液固定的切片細胞核無收縮，細胞形態較清晰，色彩鮮艷，核漿對比良好（圖1) ；95%乙醇固定的切片，細胞收縮明顯，組織結構清晰，細胞染色尚可（圖2)。

 2.2 兩種套液分別染色結果

鏡下示，經GS套液固定染色的組織，清晰度明顯改善，其他差異不大。

 2.3 兩種固定液應用GS無汞染色套液結果

鏡下示，95%乙醇經縮短固定時間后，經GS染色套液染色，細胞收縮明乙醇固定液，淋巴結轉移性乳頭狀癌顯改觀，背景清晰，無核偏位現象，除細胞質染色稍淡外，與GS套液染色無明顯差異。

                             圖1 GS固定液，淋巴結轉移性乳頭狀癌

                                圖2 95%乙醇固定液，淋巴結轉移性乳頭狀癌

3.討論

冷凍切片是病理醫師做出明確診斷的***根本依據，而制備一張高質量冷凍切片的關鍵步驟就是固定與染色，因此，固定液與染液的選擇和應用極其重要。目前，冷凍切片中固定液種類繁多，如甲醇、中性甲醛、AFF液、丙酮、乙醚乙醇混 合液等。但均不符合環保要求，而其中部分固定液（如4% 中性甲醛、AFF液等），短時間固定效果不佳，清晰度差，核漿著色淡，對比差，細胞腫脹、變形，形成空泡，易造成漏診、誤診，延誤******，故沒有列入這次對比實驗。

95%乙醇長時間固定可使組織細胞收縮明顯，不能保存組織細胞的***初完整形態，而縮短固定時間后，利用GS染色套液染色，則能克服這一弱點，制片效果明顯改善，各項指標均能達到良好標準。

傳統HE套液雖然性質穩定，但是，所應用的試劑二甲苯可對人體神經系統、造血系統造成不同程度的損傷，危害健康，蘇木精中含有汞成分，不符合環保排放的需求。而GS 套液作為一種環保型試劑，******、無色、無異味、無刺激性、pH值適中、不含汞成分，制片效果與傳統套液效果相當，值得推廣。

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