GS環保組織套液制備病理石蠟切片在免疫組化染色中的應用

GS環保組織套液制備病理石蠟切片

在免疫組化染色中的應用

                                                                 肖莎  余力  盧賢  羅陸僑

                                                                 南方醫科大學珠江醫院病理科

摘自：2011年全國病理技術新進展研討會論文匯編

免疫組化染色及診斷技術的應用日益廣泛，并己成為常規病理診斷中不可缺少的重要方法及手段，良好的組織前期處理是做好免疫組化染色的前提和基礎。在傳統的組織制備過程中，甲醛和二甲苯作為常規試劑被大量使用，而這些試劑對于人體危害極大，長期使用可使白細胞降低，它的氣味可使人產生頭暈、惡心等不適感；而哈爾濱格林標本技術開發有限公司推出的GS組織樣本制備套液是一種無醛無苯環保組織標本處理液。我們使用GS組織套 液對臨床病理組織樣本處理制備石蠟切片，進行免疫組化染色，并與傳統組織處理石蠟切片免疫組化染色進行比較，現報告如下。

1.材料與方法

 1.1取臨床送檢乳腺癌、結腸癌、肺癌、卵巢癌、淋巴瘤各2塊。

取1塊放入10%中性甲醛固定，經傳統乙醇、二甲苯脫水、透明浸蠟包埋，做石蠟切片；

取另1塊放入格林GS無甲醛固定，使用格林GS組織樣本制備套液脫水液、透明液、浸蠟液處理，包埋，做石蠟切片；

GS組織樣本制備程序:

 

序號	1	2	3	4	5	6	7	8	9
步驟	固定液	固定液	脫水液I	脫水液I	脫水液H	脫水液II	透明液	浸蠟液I	浸蠟液H
產品 編號	GSA-01 GSB-01	GSA-01 GSB-01	GSA-02 GSB-02	GSA-02 GSB-02	GSA-03 GSB-03	GSA-03 GSB-03	GSA-04 GSB-04	GSA-05	GSA-06

 1.2 免疫組化主要步驟

乳腺癌檢測ER、PR、C-erb-B2;結腸癌檢測CA-199、P53；肺癌檢測EGFR；卵巢癌檢測 CA-125；淋巴瘤檢測 LCA、CD20、CD45RO。

一抗及MaxVision檢測試劑盒均來自福州邁新生物技術有限公司。

染色步驟：

上述己脫水包埋的組織切片厚4-5nm，常規脫蠟至水，3%H202溶液室溫下孵育lOmin， PBS沖洗；抗原修復：根據一抗推薦要求分別使用ph6.0檸檬酸緩沖液、PH8.0 EDTA緩沖液及胰酶消化液進行抗原修復，PBS沖洗。一抗室溫下lh，其余按試劑盒說明書進行，DAB 顯色5-8min，蘇木素復染、分化、藍化、脫水、透明、中性樹膠封片，光鏡觀察。

3. 結果

采用格林GS環保型組織樣本套液制作的組織石蠟切片及采用傳統組織處理制作的石蠟切片，經免疫組化染色顯示，細胞內抗原成分保存良好，陽性結果定位準確，背景清晰。兩組組織樣本處理制備石蠟切片免疫組化染色結果相比無明顯差異。

4. 討論

免疫組織化學染色技術目前己經成為腫瘤病理診斷和鑒別診斷不可缺少的重要工具。一張成功的免疫染色切片與良好組織樣本的前期處理密切相關，組織固定、脫水的效果，不僅影響病理切片制作的質量，更直接影響著免疫染色的結果。隨著現代分子生物學技術越來越廣泛地被用于人類疾病研究，基因檢測等技術也對組織前期處理質量的要求越來越高。甲醛作為一種傳統的組織固定劑已被沿用了一個多世紀，它對組織滲透能力強，固定均勻，收縮小，能較好地保存組織結果，能相對較好地保存抗原的活性；加之其配制簡單，價格低廉，所以至今仍被廣泛應用。但眾所周知甲醛具有強烈的毒性：具有強烈的刺激性和腐蝕性，嚴重影響空氣和環境的質量；長期接觸會對人體造成許多危害。同時組織樣本在經甲醛固定后可引起組織內蛋白質廣泛交聯，再進行免疫組化染色時需進行抗原修復。因此，隨著對實驗環境安全更高的要求，以及尋找能夠更好保存組織抗原活性、對組織無交聯作用的固定液，就成為病理屆同仁們翹首企盼的愿望。本文作者使用的格林GS組織樣本制備套液中的固定液便是環保型無醛復合固定液，該液體無味、無刺激性：其穿透速度與甲醛大致相同，能有效地保存作者內抗原活性，免疫組化染色效果良好，完全可以取代甲醛對組織樣本的固定， 且綠色環保，可以說是固定技術革命性的突破。

傳統組織樣本石蠟切片制備過程中，二甲苯被大量使用，二甲苯屬芳香族化合物，對人體具有較強的毒害作用，且廢棄的二甲苯對空氣、環境也會造成污染；而格林GS環保套液的透明液為非苯******型復合試劑，可替代二甲苯對組織脫水后的透明處理，該透明液對組織滲透力強、處理溫和，同時組織樣本較長時間浸泡在其中也不會出現明顯的收縮和硬化，對后期的切片及各種染色起到了良好的質量保障作用。

我科室使用格林GS環保組織樣本制備套液，完全替代了甲醛及苯類試劑，建成了“綠色實驗室”，科室的同事們在安全的環境里工作學校，身心健康都得到了保證。經實際應用，環保型GS組織套液完全適用于病理診斷所需的常規HE染色及免疫組化染色，值得廣大病理工作者推廣使用。

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添加時間：2016-04-12 點擊量：1489