GS組織標本制備及切片染色套液的使用體會

GS組織標本制備及切片染色套液的使用體會

趙一嶺 王文勇 馬福成 王伯沄

第四軍醫大學基礎部病理學與病理生理學教研室暨西京醫院病理科

摘自：2011年06期《診斷病理學雜志》

隨著******各國對人類健康的關注程度不斷增加，我國對環保的要求也日趨嚴格。目前各種實驗室的環保問題已經提到了議事日程，其中也包括我們組織病理學實驗室。人們都非常渴望使用環保試劑，盡量減少化學品對人類的危害。***直接有效的辦法就是使用環保試劑。目前國內環保產品的種類還不是很多，能選擇范圍十分有限。而國外環保產品，價格很貴，對多數實驗室而言感到非常******。除此之外，我們對環保產品的了解也非常膚淺，在解決環保問題上還需要下大力氣。***近我們實驗室應用了由哈爾濱格林標本技術開發有限公司研制并生產的GS組織樣本制備套液及GS病理切片染色套液，總的來說試劑比較穩定，結果可靠，我們使用的基本情況如下。

 1. 材料和方法

  1.1 標本

臨床病理來源的人體組織，有脂肪，淋巴結，乳腺癌，腎臟，皮膚，和肝臟等；動物大、小鼠主要臟器及皮膚、肌肉，骨組織等。

  1.2方法

標本取材厚度大約0.3-0.4cm，組織大小0.2×1.5×2cm左右。骨組織大多數經過酸性脫鈣液脫鈣其中有少部分經過螯合劑EDTA脫鈣。而后采用GS組織樣本制備套液進行組織處理。根據試劑說明書的要求在Leica1050脫水機程序里進行了時間設置，組織經GS試劑處理后，孝感亞光包埋機包埋，Leica2135石蠟切片機切片。GS試劑組織脫水程序設置表（見表1），以及儲存瓶對應試劑表（見表2）。切片厚度4微米，采用 GS染色套液進行HE染色，按照說明書程序執行（見表3、4）。

表1   Leica1050脫水機GS試劑應用時間設置表

序號	脫水機菜單試劑	時間		對應液體儲存瓶
1	Formalin	1	小時	GS無醛固定液Ⅰ
2	Formalin	3	小時	GS無醛固定液Ⅰ
3	75%乙醇	5	分鐘	75%乙醇
4	90%乙醇	5	分鐘	90%乙醇
5	ABS	30	分鐘	GS脫水劑Ⅰ
6	ABS	1	小時	GS脫水劑Ⅰ
7	ABS	30	分鐘	GS脫水劑Ⅱ
8	ABS	1	小時	GS脫水劑Ⅱ
9	Xylene	1	小時	GS透明劑
10	Xylene	2	小時	GS透明劑
11	Paraffin	2	小時	GS-石蠟（5號）
12	Paraffin	2	小時	Leica石蠟
13	Paraffin	1	小時	Leica石蠟

 

 

表2   儲存瓶對應試劑表

 

表3  GS常規石蠟組織切片HE染色程序表

序號	GS	時間
1	GS脫蠟液Ⅰ	10min
2	GS脫蠟液Ⅰ	10min
3	GS脫蠟液Ⅱ	2min
4	95%乙醇	10s
5	自來水沖洗	2min
6	GS蘇木精液	3min
7	GS分化液	2min
8	自來水緩流清洗	2s
9	GS藍化液	10s
10	自來水緩流清洗	2min
11	GS伊紅液	1min
12	自來水緩流清洗	2min
13	GS除浮液	3s
14	無水乙醇	20s
15	瀝干
16	GS除水透明液	1min
17	瀝干
18	GS透明液	2min
19	GS封片膠封片

表4   肌肉活檢組織冰凍切片GS常規H.E染色程序表

序號	GS	時間
1	GS固定液	2min
2	自來水緩流清洗	3s
3	GS蘇木精液	2min
4	自來水緩流清洗	2min
5	GS伊紅液	1min
6	自來水緩流清洗	3s
7	GS除浮染液	3s
8	瀝干
9	GS透明液	1min
10	GS封片膠封片

 

2. 結果

傳統試劑和GS試劑脫水處理的組織切片和染色初步比較沒有發現不良現象。脂肪組織和皮膚切片要好于傳統試劑脫水處理的組織塊。切片和展片均比較容易。GS試劑處理石蠟組織切片常規切片厚度4微米，HE染色GS試劑按照說明書程序執行，切片染色良好，伊紅顏色鮮艷，著色均勻一致，細胞核染色清晰，沒有過染和著色不良現象，細胞核和細胞漿上色均好，對比明顯，未發現組織和細胞有收縮或腫脹。

本實驗室利用GS處理的組織石蠟切片進行了H.E染色、Giemsa 、PAS、網狀纖維 Gordon-Sweet、膠原纖維 V.G和Masson染色。均獲得了比較滿意的結果（見圖3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13）。

 3.討論

自從顯微鏡發明和利用后，1858年德國醫生和細胞學家R.Virchow以及1893年德國人施旺（T,Schwann）創立了細胞學說。才使生物組織和細胞形態研究近百年有了飛躍的發展，應該歸功于組織固定、包埋、切片和染色技術的發明和不斷的進步。甲醛固定、石蠟切片和HE染色已成為生命科學（人類，動植物）形態學觀察應用的金標準方法，作為全******通用的常規技術，為人類、動物和植物組織細胞形態學研究作出了巨大的貢獻。但是，石蠟切片和HE染色方法中所用苯、甲苯和二甲苯、組織固定劑甲醛等對人和環境都十分有害。

二甲苯的侵入途徑主要是吸入或經皮膚吸收。短期內吸入高濃度二甲苯可出現上呼吸道明顯的刺激癥狀、眼結膜及咽充血、頭暈、惡心、嘔吐、胸悶、四肢無力、意識模糊、步態蹣跚，重者可有躁動，抽搐或昏迷，有的可能出現癔病樣發作。長期接觸有可能出現神經衰弱綜合征，女性出現月經異常，常出現皮膚干燥、皸裂、皮炎。

甲醛入侵途徑與二甲苯相同，刺激呼吸道黏膜和眼結膜，強烈的刺激可引起呼吸困難和眼睛流淚。皮膚接觸可引起皮炎、皸裂難以******。在化學品安全數據表中甲醛被列為致癌劑。

多年來病理工作者處在二甲苯和甲醛危害之中，由于沒有更好的代用品，病理工作者難以擺脫二甲苯和甲醛的危害。國內外病理工作者都在試圖尋找一種較為理想的代用品，既環保又能有效代替二甲苯和甲醛的作用來滿足病理工作的需要。值得注意的是近幾年來國內外市場上出現了一些二甲苯和甲醛的代用品，例如，Van-clear環保透明劑、Clear-Advantage Xylene Substitute Polysciences, Inc.、XS-3?, Xylene Substitute Statlab、NEO-CLEAR? ( 二甲苯替代劑 ) Merck、Zinc Fixative等。環保試劑正在少數實驗室里應用，由于價格較貴，貨源少，有的代用品作用確實還趕不上二甲苯和甲醛的效果。此外，人們對代用品的性能缺乏了解，到目前為止多數病理實驗室還在沿用傳統試劑固定和脫水處理。對環保試劑還處于認識階段，還沒有普及應用，病理工作人員還沒有真正走進環保的保護區。

因此，對代用品提出了更高的挑戰。無論哪種代用品只要效果和二甲苯、甲醛相同，價格便宜，質量可靠的代用品，才能得到推廣。代用品的質量能夠讓行業內大多數人信任才能真正實現普及應用。這樣的代用品才能具有較強的生命力。

哈爾濱格林標本技術開發有限公司******在國內推出環保型GS組織樣品制備及切片染色套液，它們的產品有組織處理系列（圖1）GS無醛固定液、組織脫水Ⅰ、組織脫水Ⅱ、組織透明Ⅰ、組織透明Ⅱ、石蠟5號和石蠟6號，其中包括自動脫水機的清洗液。組織切片H.E染色系列（圖2）有切片脫蠟液Ⅰ（GS-07）、切片脫蠟液Ⅱ（GS-08）、蘇木精液（GS-09）、伊紅（GS-10）、除浮染液（GS-11）、除水透明液（GS-12）、切片透明液（GS-13）、還有封片膠（GS-02）。該公司的宗旨是健康、環保、優質、******。我們相信有這樣的理念一定能為組織實驗室提供有力的環保支持。這是向百年形成的國際通用的常規技術的挑戰。

總之，GS環保試劑性能比較穩定，H.E染色結果可靠。完全可以替代甲醛、二甲苯作為常規組織固定、石蠟切片和HE染色。也適用于多種特殊染色。具有創新和推廣價值。可以向國內外申請專利，擴大市場。在此，衷心感謝哈爾濱格林標本技術開發有限公司為病理同行作出的努力，希望貴公司為全國乃至全******病理同行開創一個無害環保的新******。

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